乙肝病毒大蛋白在乙肝患者诊疗中的临床意义

　　乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染是全世界面临的公共卫生问题之一，全球约有4亿慢性乙型肝炎病毒携带者，其中约75%生活在亚洲和西太平洋地区，中国约有1.2亿乙肝携带者{‘。慢性乙肝患者可以从无症状逐步转化为严重的慢性肝损伤如肝硬化和肝细胞癌，据报道25%一40%乙肝病毒感染者将发展为肝硬化和肝癌〔z}。目前，HBVDNA与HBeAg指标在患者HBV复制水平和抗病毒疗效监测方面存在一定的局限性。HBVDNA检测对于实验要求较高，在基层医院无法开展;患者HBV基因前C与C区基因变异后，导致HBeAg检测阴性，同时HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者逐年增加，在中国约有21%}40%患者为HBeAg阴性慢性乙肝患者〔’·。乙肝病毒大蛋白存在于乙肝病毒管状颗粒和Dane颗粒，其包含Pre-S1,Pre-S2和S三个结构域，参与了病毒的侵人、组装和复制等过程〔‘〕。本研究通过检测慢性乙肝患者血清中乙肝病毒大蛋白含量，探讨其对于慢性乙肝患者诊断、抗病毒疗效评估的意义。　　1对象与方法　　1.1研究对象收集本院2010年6月至2011年12月间慢性乙肝病毒患者血清220例，男性132例，女性88例，年龄16}70岁，平均年龄38.6岁。诊断符合2005年中华医学会肝病学分会、中华医学会传染病分会联合制订的《慢性乙型肝炎防治指南》的慢性乙肝诊断标准〔5)。所用血清均保存于一80℃以备检测。　　1.2试剂与方法乙肝血清标志物采用ELISA法检测，试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供;PreS1采用ELISA方法，试剂由上海复星长征医学科学有限公司提供;乙肝病毒大蛋白采用ELISA方法，试剂由北京热景生物技术有限公司提供，利用酶标仪测出A值，临界A值为0.105oHBVDNA采用荧光定量PCR方法检测(敏感度为500拷贝/ml},试剂由广州中山大学达安基因股份有限公司提供。　　1.3治疗方法抗病毒治疗病例口服阿德福韦醋10rng，每日1次，分别于治疗前和治疗后12,24和48周进行随访，并留取患者血清以备检测。　　1.4统计学方法采用SPSS13.0软件进行统计学分析。率的比较采用丫检验，P<0.OS为有统计学意义。　　2结果　　2.1HBV-LP,HBVDNA,Pre-Sl和HBeAg阳性率比较220例慢性乙肝患者进行血清HBV-LP,HBVDNA,Pre-S1和HBeAg检测，检测情况见表1}统计分析如下:HBV-LP,HBVDNA,Pre-S1和HBeAg阳性率差异具有统计学意义(丫=83.895,P<0.OS);HBV-LP与HBVDNA阳性率差异无统计学意义(万zX=1.147,P=0.284);HBV-LP与Pre-S1阳性率差异具有统计学意义(丫=36.347,P<0.OS);HBV-LP与HBeAg阳性率差异具有统计学意义(XZ=54.797,P<0.OS)。　　2.2不同HBeAg模式下HBV-LP与HBVDNA检测情况结果对152例HBeAg阳性血清和HBeAg阴性血清进行HBV-LP与HBVDNA检测结果见表2oHBeAg阳性组HBV-LP阳性率明显高于HBeAg阴性组，差异具有统计学意义(丫=20.976,P<0.OS);HBeAg阳性者HBVDNA阳性率明显高于HBeAg阴性组，差异具有统计学(丫=33.421,P<0.05);无论HBeAg阳性组或者阴性组，HBV-LP与HBVDNA阳性率均差异无统计学意义(XI.308，P>0.OS)。　　2.3抗病毒疗效观察对86例患者进行抗病毒疗效观察，结果见表3oHBV-LP和HBVDNA均随着抗病毒治疗进行，阴转率相应升高，同时发现HBV-LP阴转较HBVDNA缓慢。41例HBV-LP阴转病例其HBVDNA均呈阴性。8例HBVDNA阴转病例停药后出现反弹，其HBV-LP水平一直呈阳性。　　3讨论　　乙肝病毒大蛋白(HBV-LP，包括Pre-S1,Pre-S2和S)是构建管状颗粒和Dane颗粒包膜蛋白重要成分。乙肝病毒大蛋白具有双币拓扑学构像，面向内质网的管腔的PreS区可以介份戈热病毒颗粒与细胞吸附，而面向细胞质的PreS区在病毒组装中发挥相关功能，同时大蛋白的Pre-S2区具有与蛋白激酶C相互作用启动细胞间信号转导的作用，还有研究显示其通过激化细胞Src/PI3k/Akt信号通路而致癌·6一8{。乙肝病毒大蛋白在肝细胞积累可以导致内质网应急反应，导致肝细胞损伤，可能与HBV-LP促进CAPN2,eIF3K及PPP2CB表达促发细胞凋亡相关〔9〕，受损肝细胞释放病毒颗粒到血液中，使血清检测HBV-LP成为可能。目前临床上主要借助于HBVDNA和HBeAg来反映HBV的感染和复制，血清中DNA含量要远低于肝细胞中共价闭合环状DNA(cccDNA)含量，从而易导致漏检和HBVDNA反弹等情况。临床上函待新的HBV感染和复制血清学标志物。　　本研究表明，在慢性乙肝患者中，HBV-LP的检出率为95.91%和HBVDNA检出率93.36%差异无统计学意义，明显高于Pre-S1和HBeAg阳性率，与范公忍等报道的一致，其原因在HBV病毒包膜蛋白具有复杂的拓扑结构，而Pre-S1检测试剂仅针对线性表位，导致其检出率要低于模拟空间构象HBV-LP检测试剂。HBeAg检出率低可能原因在于HBV前C/C区的变异以及HBeAg阴性慢性乙肝的流行。无论在HBeAg阳性或阴性患者中，HBV-LP与HBVDNA具有高度的一致性，提示其可以作为HBeAg阴性患者的血清监测指标。在阿德福韦酷抗病毒治疗过程中，随着抗病毒治疗时间推移，HBV-LP与HBVDNA含量均呈现下降趋势，但HBV-LP下降要慢于HBVDNA的下降，部分HBV-LP阳性病例出现了HBVDNA反弹的情况，这可能与病毒大蛋白的反式激活作用相关。　　4参考文献　　Azam F,Koulaouzidis A. Hepatitis B virus and hepatocarcinogenesis[J].{H}Annals of Hematology,2008.125-129.　　Zhou YH,Wu C,Zhuang H. Vaccination against hepatitis B:the Chinese experience[J].{H}Chinese Medical Journal,2009.98-102.　　Funk ML,Rosenberg DM,Lok AS. World-wide epidemiology of HBeAg-negative chronic hepatitis B and associated precore and core promoter variants[J].{H}Journal of Viral Hepatitis,2002.52-61.　　Schadler S,Hildt E. HBV life cycle:entry and morphogenesis[J].Viruses,2009.185-209.　　中华医学会肝病学分会,中华医学会感染病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南[J].{H}中华传染病杂志,2005,(6):421-431.　　Bruss V. A short linear sequence in the pre-S doman of the large hepatitis B virus envelope protein required for virion formation[J].{H}Journal of Virology,1997.9350-9357.　　Hild E,Munz B,Saher G. The PreS2 activator MHBs(t) of hepatitis B virus activates c-raf-1/Erk2 signaling in trangenic mice[J].{H}EMBO Journal,2002.525-535.　　Liu H,Xu J,Zhou L. Hepatitis B virus large surface antigen promotes liver carcinogenesis by activating the Src/PI3K/Akt pathway[J].{H}CANCER RESEARCH,2011.7547-7557.　　郑大利,黄清玲,吴云丽. 乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白致HepG2细胞凋亡的蛋白质组学分析[J].中华微生物与免疫学杂志,2010.1085-1091.　　范公忍,熊锦华,李树. 乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测与HBV-DNA及血清标志物的相关性分析[J].{H}现代检验医学杂志,2011,(3):127-131.doi:10.3969/j.issn.1671-7414.2011.03.045.