HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝细胞癌患者HBcAg与HBV-DNA、HBsAg的关系

基金项目:广西自然科学基金[项目编号：桂0728190]笔者采用免疫组化方法检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝细胞癌(hepatocellular,carcinoma,HCC)患者癌旁肝组织中HBcAg的表达，并检测患者手术前的血清HBV-DNA含量和HBsAg含量，探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎合HCC患者HBcAg的表达与HBV-DNA、HBsAg的关系。同时采用免疫组化方法检测无乙肝病毒感染的肝血管瘤或肝囊肿切除术后所取的肝组织中HBcAg的表达，作为对照组进行对比分析。现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料：选取2005年1月~2008年1月在广西医科大学第一附属医院肝胆外科住院治疗,未用过抗病毒药物的HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝癌患者50例为试验组，均行肝癌切除术后所取癌旁肝组织标本。慢性乙型肝炎的诊断均符合《慢性乙型肝炎防治指南》[1]，HCC的诊断均符合《原发性肝癌诊疗规范》[2]，其中男46例，女4例，年龄29~68岁，平均49岁。选取2005年1月~2008年1月在广西医科大学第一附属医院肝胆外科住院治疗,无乙肝病毒感染的肝血管瘤或肝囊肿切除术后所取的肝组织标本20例为对照组，其中男10例，女10例，年龄33~63岁，平均47岁。患者籍贯和现住址均在广西壮族自治区。

1.2方法：检测癌旁肝组织HBcAg表达，并检测血清HBV-DNA含量和HBsAg含量。肝组织HBcAg表达的检测用SupervisionTM二步法免疫组化方法，一抗为兔抗人多克隆抗体，由北京中杉金桥生物技术有限公司提供，二抗为SupervisionTM兔-HRP检测系统，二抗及二氨基联苯胺(DAB)酶底物显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，由广西医科大学第一附属医院病理科完成检测。HBV感染肝组织石蜡切片用HBcAg(GBO58629)染色。血清HBV-DNA检测用定量PCR法。血清HBsAg测定采用ELISA一步法。由广西医科大学第一附属医院实验中心完成检测。

1.3结果判断标准：HBV-DNA<1×103 copies/ mL 为阴性，HBV-DNA>1×103 copies/ mL 为阳性，HBV感染肝组织石蜡切片病变细胞胞核着色，DAB显色为阳性。

1.4统计学方法：采用SPSS11.5统计学软件进行数据处理，计量资料以中位数表示，采用秩和检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1癌旁肝组织HBcAg阳性率比较：试验组50例HBeAg阴性患者癌旁肝组织HBcAg阳性30例，占60%;阴性20例，占40%;对照组20例肝组织HBcAg均为阴性。

2.2血清HBV-DNA阳性率比较：试验组50例HBeAg阴性患者血清HBV-DNA阳性率为64%，阴性率为36%，联合检测癌旁肝组织HBcAg和血清HBV-DNA阳性率为80%。

2.3试验组中肝组织HBcAg阳性组的血清HBsAg定量值与阴性组的血清HBsAg定量值比较：阳性组血清HBsAg 199.345 ng/ml，阴性组为148.435n g/ml，差异无统计学意义(P=0.096>0.05)。

3讨论

血清HBeAg水平与乙肝病毒复制密切相关，但是对于e抗原阴性的慢乙肝合并原发性肝癌的患者来说，HBeAg消失并不能代表病毒水平的完全降低或疾病的恢复。在CHB阶段，HBV可在免疫压力下发生基因突变，尤其是前C区变异，使HBeAg表达障碍，从而血清中HBeAg转阴或检测不到，但HBV仍然在复制和传播 [3]。已有研究表明，HBeAg阴性的HBV感染与肝癌的发生、发展密切相关[4-5]。HBV-DNA 阳性是HBV感染及复制的重要依据，血清HBV-DNA含量在一定程度上反映了肝细胞内HBV 复制的活跃程度，但血清HBV-DNA水平高低不能完全反映肝细胞内HBV-DNA复制水平[6]。HBcAg是HBV的核心成分，它包裹着HBV病毒核酸，容易和HBcAb结合形成抗原抗体复合物或被吞噬，一般只有在肝细胞和直接从Dane颗粒提取才能测出。在试验中，50例试验组和20例对照组的癌旁肝组织均采用HBV感染肝组织石蜡切片病变细胞胞核着色，以DAB显色为阳性为标准，试验组50例癌旁肝组织HBcAg阳性30例，阴性20例;对照组20例肝组织HBcAg均为阴性。因二氨基联苯胺(Diaminobenzidine,DAB)是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的显色底物，反应产物因不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物，故实验结果具有可靠性。50例试验组中癌旁肝组织HBcAg阳性率为60%，阴性率为40%，血清HBV-DNA阳性检出率为64%，阴性率为36%，但是采用联合检测，其阳性率则高达80%，故患者乙肝两对半显示HBeAg阴性，血清HBV-DNA阴性，仍然不能完全排除肝组织中不存在HBV的可能,而肝组织免疫组化检测HBcAg的表达模式比血清HBV-DNA定量和乙肝两对半定量更能准确地反映肝细胞内HBV复制的情况，对判断疾病预后、制定治疗方案有着重要的指导作用[7]，故采用联合检测对HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝细胞癌的诊断及治疗、减少漏诊误诊、预防复发有重要意义。

HBV-DNA作为HBV的基因组成和复制的模板，被认为是乙型肝炎病毒复制和传染的最直接的病原学依据[8]。但是，HBsAg在血液中多为不含病毒颗粒的空壳，其阳性不能反映病毒有无复制、复制程度、传染性强弱及预后。在50例HBeAg阴性慢性乙型肝炎合并原发性肝癌患者术前血清学检查中，肝组织HBcAg的表达模式与患者血清HBsAg定量之间无显著性差异(p>0.05)。因HBsAg是HBV在肝细胞复制过程中产生的蛋白产物，HBV感染后进入人体肝细胞，HBV-DNA与人体肝细胞DNA发生整合，整合后的DNA仍然可以编码HBsAg并将其分泌到人体血液循环中，即使HBV-DNA阴性、e抗原阴性，HBsAg仍然可以在人体内长期存在，因此，HBsAg含量的多少并不能说明肝组织HBV的复制情况。

通过对HBeAg阴性慢乙肝合并原发性肝癌患者肝组织免疫组化检测的方法检测HBcAg的表达模式的研究，发现尽管患者血清HBeAg阴性、血清HBV-DNA阴性，仍可在部分患者肝组织中检测出HBcAg阳性，而HBcAg是HBV的核心成分，比血清HBV-DNA等血清标志物更能说明HBeAg阴性慢乙肝合并原发性肝癌患者肝组织内存在着HBV，反映HBV在肝组织中的复制情况。因此，对于HBeAg阴性慢乙肝合并原发性肝癌的患者，尽管血清标志物不支持慢性乙型肝炎药物治疗，但是患者肝组织中HBcAg阳性提示体内仍有HBV存在，仍然需要长期药物治疗，以延缓病情发展，减少原发性肝癌的复发。

4参考文献

[1]中华医学会肝病学分会及中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[M].北京：中国医药科技出版社,2005.

[2]中华人民共和国卫生部.原发性肝癌诊疗规范[J].北京:临床肝胆病杂志,2011,27(11):1141.

[3]陈钦艳,董柏青,杨进业,等.乙型肝炎病毒e系统、DNA与原发性肝癌发生的相关性研究[J].实用预防医学,2009,16(4):1014.

[4]Chan HL，Tsang SW，LeungNW，et al.Occult HBV infection in crypt ogeniclivercirrhosis in an area with high prevalence of HBV infection[J].Am JGastroent erol,2002,97(5):1211.

[5]AokiM，Saito T，WatanabeH，et al.Clinical significance of a higly sensitiveenzyme immunoassay of hepatitis B surface antigen using a novel eleetron spinresonance technique[J].J Med Virol,2002,66(2):166.

[6]肖影群,章萍,邓茜.肝组织病理检查对隐匿性慢性乙型肝病的诊断价值[J].南昌大学学报(医学版)，2011,51(4):46.

[7]董红筠,赵桂鸣,李颖.慢性乙肝患者肝脏炎性反应活动与肝组织HBcAg表达的相关性分析[J].临床肝胆病杂志,2007,23(1):13.

[8]崔红花,王晶莹,谢凤.HBV PreS1抗原和HBV-DNA的监测及临床评价[J].中国实验诊断学,2007,4(11):482.

[收稿日期：2014-01-10编校：潘宏竹]