丙型肝炎疾病人群中RIBA不确定结果的片段类型和出现概率
发表时间：2014-08-13 浏览次数：1162次
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种主要血液传播的疾病，HCV慢性感染可导致肝脏慢性炎性反应坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌，对患者的健康和生命产生危害。丙型肝炎病毒已呈全球性流行[1]。本文通过对486份 HCV感染患者的血清进行抗-HCV EIA诊断试剂和确认试剂联合检测，同时用RT-PCR检测HCV RNA来进行研究，以便了解HCV单片段抗体血清在疾病HCV感染人群中的分布、存在状态及其意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料：标本来源为486份HCV RNA阳性标本，来自于佛山市顺德区中医院感染科的HCV感染患者。
1.2 试剂：所评估的试剂均购自生产厂家，国内5个厂家试剂代号分别为A、B、C、D、E，国外2个试剂厂家代号分别为F和G，且7 个厂家的试剂均在有效期内。确认试剂为CHIRON® RIBA® HCV 3.0 SIA;核酸试剂为Roche HCV定量试剂盒;转氨酶试剂为上海荣盛生物丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(赖氏法)。
1.3 仪器设备：安图IWO-960洗板机、安图PHOMO酶标仪、 ABI7500荧光定量PCR仪、岛津-UV1601分光光度计、恒温箱、振荡器。
1.4 检测方法和结果判定标准：所有检测严格按照说明书进行。抗-HCV EIA诊断试剂盒检测结果按照酶标仪的检测结果，样本OD值大于厂家Cut off值者为阳性，小于Cut off值者为阴性;抗-HCV确认试剂CHIRON® RIBA® HCV 3.0 SIA结果判定，按照说明书结果判定对硝酸纤维素膜上对应抗原条带的解释，没有1+ 或者更高强度反应活性的HCV带呈现，或者仅仅hSOD带呈现1+ 或者更高强度的反应活性为阴性、任何单一的1+或者更高强度反应活性的HCV带呈现，或者hSOD带呈现1+或者更高强度的反应活性，同时有一条或多条HCV带呈现1+或者更高强度的反应活性为不确定单片段抗体标本、至少有两条HCV带呈现1+或者更高强度的反应活性则为阳性;丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒测定活力大于40(卡门氏单位)为阳性;HCV RNA PCR荧光定量检测结果大于500 IU/ml为阳性[2]。
2 结果
HCV感染患者人群中RIBA不确定标本检出情况：标本经过 CHIRON® RIBA® HCV 3.0 SIA确认试剂确认，单独抗-Core区阳性的标本有8份，所占比例为1.65%;出现3份抗体确认结果为阴性RNA阳性标本，所占比例为0.62%，没有出现抗-Ns3、抗-Ns4 和抗-Ns5单独阳性的样本;经RIBA确认的29份样本其抗-Core、 Ns3、Ns4、Ns5区抗体阳性检出率分别为86.21%、48.28%、 44.83%、24.14%，检出率统计如下：C100(P)(NS4)检出13 (44.83)，c33c(NS3)检出14(48.28)，c22(p)(CORE)检出25(86.21)，NS5(NS5)检出7(24.14)。
3 讨论
HCV感染后机体可诱导机体进行细胞和体液免疫应答，特异性体液免疫应答作为机体感染及治疗的指标，这种应答分别产生针对结构区和非结构区抗原的特异性抗体，但各种抗原的生物学或病原学存在很大的差异、因而HCV感染机体后不同抗体的出现频率及出现的时间也有很大差异，即各片段抗体出现的顺序或时间可以是全部出现、部分出现或单独以单片段形式出现[3]。从检测的HCV感染患者的各区段阳性率可以看出29份Core区阳性率为86.21%且存在8份单独抗-Core区阳性的标本;HCV核心蛋白是丙肝病毒的重要结构蛋白，它在病毒增殖和感染、慢性致病、肝细胞癌变、免疫功能障碍中起重要作用，且由于Core区蛋白致使丙肝病毒在体内不易被清除而呈慢性感染，在HCV各种不同的亚型中具有高度的保守性，是导致病毒持续感染的关键因素;所以Core区在抗-HCV EIA检测中的血清学标志极为重要;另外从 HCV感染患者的检测结果也可以看出虽然没有出现单独抗-Ns3、 Ns4和Ns5区的标本，但是其在阳性检出率分布中仍旧占据一定的比例，说明抗- Ns4和抗-Ns5 对HCV抗体检测补充作用，可以提高敏感性。另外Core对丙肝检测非常重要，各厂家应该重视 Core的敏感性，进一步提高产品的灵敏度。
4 参考文献
[1] 朱万孚,庄 辉.医学微生物[M].北京:北京大学医学出版社,2007:486.
[2] 江朝富,崔徐江,汪传喜.现代成分输血与临床[M].天津:天津科学技术出版社,2003:393.
[3] 谢 立,吴晓东.丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义[J].世界华人消化杂志,2005,13(7):884.
[收稿日期：2014-05-20 编校：郑英善]
