尿毒症病人血液透析前后AGEP和 NO变化的关系及临床意义

　　作者：弓玉祥 作者单位：东南大学附属中大医院 肾病实验室，江苏 南京 210009

　　【摘要】 目的:探讨尿毒症病人血液透析前后糖基化终产物肽(AGEP)和NO变化的关系。方法：流动注射分析法测AGEP和硝酸还原酶法测NO。结果：血液透析前后NO水平比较，P<0.01,有显著性差异;血液透析前后NO水平与正常人之间比较，均P<0.01，有显著性差异。血液透析前后AGEP水平比较，P<0.01,有显著性差异;血液透析前后AGEP水平与正常人相比较，均P<0.01,有显著性差异。AGEP和NO在透析前后的变化呈正相关性(r=0.881，P<0.01)。结论：AGEP和NO在血液透析后都降低,均能反映血液透析的效果。

　　【关键词】 尿毒症

　　糖基化终产物(advanced glycation end products,AGES)还原糖(葡萄糖)与蛋白质、氨基酸等的游离氨基端通过一系列复杂的非酶促反应形成结构多样的不可逆聚合物[1]，具有棕色变、自发铟、自发荧光、广泛交联的特性，它们在糖尿病、肾脏病等慢性疾病的并发症发生、发展中的作用越来越引起广泛的关注[2]。NO是一种反应性极强、具有舒血管作用的自由基，兼有第二信使和神经质作用，能够介导和调节多种病理生理过程。其化学性质活泼，极易穿过生物膜，迅速与水、O2和超自由基反应，生成硝酸盐和亚硝酸盐(NO-3/NO-2)[3]，故测定血中NO-3/NO-2可间接反映NO的水平。本研究旨在探讨尿毒症病人血液透析前后糖基化终产物肽(AGEP)和NO的变化关系及其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 主要仪器

　　离心机801，上海分析仪器厂; 754紫外分光光度计，上海分析仪器厂;水浴箱，上海医用恒温设备厂;SK1快速混匀器，江苏国华仪器厂;带荧光检测器的高效液相色谱仪，日本岛津公司;低温高速离心机，日本日立公司。

　　1.2 实验对象

　　37例来自本院血液净化中心尿毒症透析病人，男17例，女20例，年龄25 60岁。54例来自经门诊体检过的正常健康人，男24例，女30例，年龄25 60岁。

　　1.3 主要试剂

　　蛋白酶K，Sigma公司;NO试剂盒，南京聚力生物医学工程研究所;三氯醋酸、氯仿等其它试剂均系国产分析纯。

　　1.4 实验方法

　　取37例透析病人透析前后和54例正常健康人全血，于3000 r·min-1离心5 min，取血清( 浆)按操作说明书操作。用硝酸还原酶特异性地将NO-3还原为NO-2，再通过其显色深浅进行比色，反映出NO水平的高低。参阅文献[4]流动注射分析法，预先处理的样品注入高效液相色谱仪进样环，在高压泵的驱动下，随流动相流至荧光检测器，由于样品中AGEP具有特征性的荧光，荧光检测器可测定样品中AGEP的荧光值，并经数据处理获得结果。

　　1.5 统计学处理

　　数据以x-±s表示，组间比较用方差分析检验，AGEP和NO之间关系用相关回归分析。

　　2 结 果

　　正常健康人血液中NO浓度为(65.7±15.8) μmol·L-1;尿毒症病人血液透析前血液中NO浓度为(13.34±5.33) μmol·L-1，透析后为(6.17±3.34) μmol·L-1。血液透析前后NO浓度之间比较，P<0.01,有显著性差异;血液透析前后NO水平分别与正常人之间比较，均P<0.01，有显著性差异。

　　正常健康人血液中AGEP含量为(1.385±0.131) U·ml-1;尿毒症病人血液透析前AGEP含量为(6.089±0.257) U·ml-1，透析后为(4.215±0.238) U·ml-1。血液透析前后AGEP含量相比较，P<0.01,有显著性差异;血液透析前后AGEP含量分别与正常人相比较，均P<0.01,有显著性差异。

　　尿毒症病人血液透析前后AGEP含量变化(Y)与尿毒症病人血液透析前后NO浓度变化(X)的回归方程为：Y=1.148+0.103X，r=0.881，P<0.01。

　　3 讨 论

　　尿毒症病人血液NO比正常人的低，可能是由于AGEP之一咪唑龙是蛋白质精氨酸碱基上胍基与3DG[5]反应产物，而NO的前体LArg被过多地生成AGEP而造成NO合成不足。目前临床用氨基胍(aminoguanidine,AG)来抑制诱导型NO合酶(iNOs)的活性，而iNOs直接参与了自由介导的脂质过氧化和AGEP的沉积，AG通过抑制iNOs活性，降低了血压，增加了肾血流量和肾小球滤过率，延缓了肾小球动脉粥样硬化的发生。尿毒症病人NO明显降低，还有一个原因就是体内清除NO能力较强，NO与血红蛋白的r铁离子迅速结合成高铁蛋白，使血红蛋白携氧能力下降，从而消耗了部分NO。所以尿毒症病人脸色常呈现灰褐色，而通过血液透析又可降低NO，反过来又能减少NO与血红蛋白的r铁离子结合机会，从而有助于病人血氧结合力升高。此外，临床上常用促红细胞生成素来增加血红蛋白量来抵消NO的负面影响。由于血红蛋白携氧能力下降，血管内皮细胞缺氧，导致内皮功能障碍，而发生内皮功能障碍则表现为，NO及其它舒张因子减少或活性降低、E D C F释放增加等。尽管这种情况下内皮细胞增殖速度亦加快，但再生的内皮细胞功能不良，无法发挥内皮细胞的作用。许多实验指出，内皮功能障碍可能是某些原发疾病如动脉硬化、高血压[6]的结果，但同时又可能是促使这些疾病病理状况增强或恶化的原因[7]，也是临床血液透析病人透析、生存时间延长必须面临和解决的问题。由于NO在血小板粘附与抑制、基础血压的维持、肺泡血液灌流和通气的匹配、长期突触抑制、阴茎海绵体舒张和骨髓的微循环、杀灭病原菌和攻击肿瘤细胞毒性效应以及免疫调节等多种病理、生理过程，具有很重要的作用，因此检测NO有较高的临床意义。

　　尿毒症病人AGEP比正常人高是由于AGES是一种不可逆聚合物并随着疾病的缓慢发展而逐渐积累，并且小分子的糖基化终产物AGEP可与靶组织或蛋白(如胶原、低密度脂蛋白)再次共价联结形成第2代AGES，从而在尿毒症等慢性血管并发症发生中发挥更加重要的作用[89]。尿毒症病人血液透析后AGEP明显下降，证明恰当的透析有助于清除血清中AGES，尤其是AGEP，减少AGES在体内积聚[10]，同时也说明AGEP是观察分析AGES清除效果的十分理想的指标[11]。

　　通过尿毒症病人血液透析前后AGEP的变化与透析前后NO的变化相关性比较显示，两者变化呈正相关性(r=0.881，P<0.01)，两者在血液透析后均降低，提示检测AGEP和NO均能反映血液透析的效果。

　　【参考文献】

　　[1]BROWNLEE M.Advanced protein glycosylation in diabetes and aging[J].Annu Red Med,1995,46:223.

　　[2]BROWNLEE M.Lilly lecture 1993:glycation and diabetic complications[J].Diabetes,1994,43:836.

　　[3]LOWENSFEIN C G,DINERMAN J L,SYNDER S H. Nitric Oxide:a physiologic messenger[J].Am Intern Med,1994,120:227.

　　[4]孙子林，刘乃丰. 运用流动注射分析技术检测血清糖基化终产物肽水平[J].中国内分泌代谢杂志，2003，16(4)：250.

　　[5]NAGARAJ R H,MONNIER V M.Protein modification by the degradation products of ascorbate:formation of a novel pyrrole from the maillard reaction of Lthreose with proteins[J].Biochim Biophys Acta,1995,1253:75.

　　[6]NOLL G,TSHCHUDI M,LUSCHER T F.Endothelium and high blood pressure[J].Int J Microcirc Clin Exp,1997，17(5):273279.

　　[7]DREXLER H.Endothelial dysfunction:clinical implacations[J].Prog Cardiovasc Dis,1997，39(4):287324.

　　[8]VLASSARA H.Recent progress in advanced glycation end products and diabetic complications[J].Diabetes,1997,46:S19S25.

　　[9]GUGLIUCCI A,MENINI T.Circulating advanced glycation peptides in streptozotocin induced diabeticrats:evidence for preferential modification of lgG light chains[J]. Life Sci,1998,62:21412150.

　　[10]FISHBANE S,BUCALA R,PEREIRA B J ,et al .Reduction of plasma apolipoproteirr B by effective removal of circulating glycation derivatives in uremia[J].Kidney Int,1997,52:16451650.

　　[11]YANAGISAWA K, MAKITA Z, SHIROSHITA K,et al. Specific fluorescence assay for advanced glycation end products in blood and urine of diabetic patients[J].Metabolism,1998,47:13481353.