1型糖尿病并发血管病变患者Th1/Th2细胞亚群的研究

　　作者：陈捷　　作者单位：250001 济南市，山东中医药大学第二附属医院内分泌科

　　【摘要】 目的 探讨1型糖尿病并发血管病变患者体内Th1/Th2细胞亚群的变化。方法 用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测了15例1型糖尿病合并有下肢血管病变患者血清中Th1型细胞亚群分泌的细胞因子IFNγ、TNFα和Th2型细胞亚群分泌的细胞因子IL4、IL10的水平变化，20例无糖尿病早期合并症患者和20例健康志愿者做为对照组。结果 1型糖尿病患者血清中Th1型细胞因子IFNγ、TNFα的水平显著高于对照组(P<0.01);Th2型细胞因子IL4、IL10的水平明显低于对照组(P<0.01);糖尿病并发血管病组Th1型细胞因子IFNγ、TNFα显著高于单纯糖尿病组(P<0.05)，而Th2型细胞因子IL4、IL10的水平明显低于单纯糖尿病组(P<0.05)。结论 当1型糖尿病并发血管病变时，患者体内Th1/Th2细胞亚群发生了Th2-Th1的漂移改变。

　　【关键词】 糖尿病，1型;血管病变;Th1;Th2

　　【Abstract】 Objective To investigate the changes of Th1/Th2 lymphocytes subsets in patients with type 1 diabetes mellitus complicated by vascular lesion by means of the detection of the changes of Th1/Th2 lymphocytes subgroup.Methods The enzyme linked immunosorbent assay was used to determine the levels of TNFα and IFNγ in serum secreted by Th1 lymphocytes subgroup and the levels of IL4 and IL10 secreted by Th2 lymphocytes subgroup in 15 patients with type 1 diabetes mellitus complicated by vascular lesion, the other 21 patients with type 1 diabetes mellitus and 20 healthy volunteers were taken as controls. Results The serum levels of Th1type cytokines including TNFα and IFNγ in diabetic patients were significantly higher than those of normal controls(P<0.01);the levels of serum Th2type cytokines including IL4 and IL10 were significantly lower than those of normal controls (P<0.01).The serum levels of Th1type cytokines including TNFα and IFNγ were significantly higher than those of the patients without complications (P<0.05),however, Th2type cytokines including IL4 and IL10 in diabetic patients complicated by vascular lesion were significantly lower than those of the patients without complications (P<0.05).Conclusion The significant drift changes in Th2/Th1 occurre in Th1/Th2 lymphocytes subsets in patients with type 1 diabetes mellitus complicated by vascular lesion,which provides theoretical basis for the exploration of the pathogenesis and monitoring of the disease.

　　【Key words】 type 1 diabetes mellitus;vascular lesion;Th1/Th2 lymphocytes subsets cytokines

　　1型糖尿病(T1DM)是一种胰岛β细胞免疫损伤所致的器官特异性疾病，而细胞因子对调节细胞免疫起主要作用。辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)淋巴细胞亚群及其分泌的细胞因子近年来备受人们关注， Th1型细胞以表达干扰素γ(IFNγ)、肿瘤坏死因子α(TNFα)为主，可以增强杀伤细胞的细胞毒性作用，激发迟发型超敏反应，介导细胞免疫应答;Th2型细胞以分泌白介素4(IL4)、IL10为主，可以促进抗体的产生，介导体液免疫应答。机体Th1/Th2平衡状态的失调可导致细菌、病毒等微生物感染，肿瘤免疫逃逸、自身免疫性疾病和移植排斥反应的发生。有研究证实在胰岛β细胞的损伤和糖尿病的发生过程中，Th1/Th2型淋巴细胞及其分泌的细胞因子网络发挥了重要作用[1]。本研究通过对Th1/Th2型细胞分泌的不同细胞因子的检测探讨了T1DM并发血管病变患者体内Th1/Th2型细胞亚群的改变。

　　1 资料与方法

　　1.1一般资料 35例T1DM组患者均来自2003年6月至2007年12月来我院就诊患者，并依据1999年WHO糖尿病诊断及分型标准确诊，其中男18例，女17例;年龄10～40岁，平均年龄(28±12)岁;平均病程(7±5)年;所有患者均不伴有类风湿、肿瘤等自身免疫性相关疾病。根据患者有无合并血管病变分为糖尿病合并血管病变(BDM)组15例和无糖尿病早期合并症(SDM)组20例，BDM组经彩色多普勒超声检查均合并有血管病变，血管形态学改变主要为管壁内膜粗糙、增厚、血管迂曲、粥样硬化斑块形成及管腔不规则狭窄和扩张，并且多为多节段损害，血流动力学变化表现为狭窄口血流速度增加，狭窄远端血流速度减慢;正常对照者20例(NC组)均为健康体检中心志愿者，男11例，女9例;年龄12～38岁，平均年龄(27±10)岁;无糖尿病及其它自身免疫性疾病和遗传性家族史，口服葡萄糖耐量试验正常。2组均为无血缘关系，均取得知情同意。

　　1.2 研究方法

　　1.2.1 标本采集：2组晨空腹采血6 ml，分离血清后，置-20℃ 待测，测定前置室温或冷水中复融，4℃ 3 000 r/min，离心5 min，取上清液测定。

　　1.2.2 测定方法：IFNγ、TNFα、IL4、IL10检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)，在492 nm处测定吸光度(A值)，所有A值都应减除空白值后再行计算，绘出标准曲线，根据样品A值求出标本中各因子浓度。检测试剂盒由军事医学科学院邦定生物公司提供，严格按照试剂盒说明操作。

　　1.3 统计学分析 应用SPSS 12.0统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验和方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 T1DM组与NC组Th1/Th2型细胞因子比较 T1DM患者血清中Th1型细胞因子IFNγ、TNFα的水平显著高于NC组(P<0.01)，Th2型细胞因子IL4、IL10的水平显著低于正常NC组(P<0.01)。

　　2.2 SDM组与BDM组Th1/Th2型细胞因子比较 BDM组患者Th1型细胞因子IFNγ、TNFα显著高于SDM组(P<0.05)，而Th2型细胞因子IL4、IL10的水平明显低于SDM组(P<0.05)。

　　3 讨论

　　T1DM是遗传易感个体在环境因素影响下发生的慢性自身免疫紊乱，细胞亚群及其分泌的细胞因子在疾病的发生、发展过程中起了重要作用。Th1/Th2细胞之间互为调节细胞，通过其分泌的不同细胞因子间的相互制约，处于动态平衡状态，维持着机体免疫系统的正常功能。胰岛β细胞在丧失免疫耐受性后，免疫调节功能失调，刺激Th1分泌IFNγ、TNFα等细胞因子;同时，抑制Th2细胞分泌IL4、IL10，从而导致细胞因子不平衡，致使自身β细胞成为靶细胞，其细胞膜成分成为自身免疫应答的杀伤目标，进而激活细胞毒性T细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞，产生氧自由基、一氧化氮和一些细胞因子(如TNFα、IFNγ)，最终对胰岛β细胞产生直接毒性。T1DM的最初形式为胰岛炎，此阶段大部分β细胞仍然是完好的。但是，当出现糖尿病症状时，80%的β细胞已经被破坏。此时需要注射胰岛素来维持T1DM患者的生命。但是这只是针对血糖升高的一种补救策略，并不能抑制自身免疫反应来阻止T1DM的发展。患者可能最终发生慢性并发症，比如肾脏、眼部、神经系统和血管系统的损伤等[2，3]。

　　IFNγ是机体最重要的免疫调节因子之一，是可以直接对胰岛β细胞产生细胞毒的细胞因子。当一定量的胰岛β细胞自身抗原被抗原递呈细胞加工、处理并与MHCⅡ类分子一起被递呈到APC细胞表面时，可引起自身免疫信号的释放，使细胞向着Th1方向分化，Th1型细胞因子的分泌增加。TNFα是一种主要源于巨噬细胞和Th1细胞的炎性因子，它可以通过诱导内皮细胞黏附分子的表达增强多形核白细胞的黏附作用;还可以通过促进sis基因转录刺激内皮细胞凝血组织因子的生成，减少血栓调节蛋白的分泌，促进血栓形成。有研究证明TNFα和IFNγ联合应用可诱导经典的caspase介导的胰腺瘤和胰岛细胞的凋亡。高表达的TNFα和IFNγ还可以刺激Th0细胞Th1途径的分化及TDTH细胞和CD+8T细胞的成熟，释放更多的Th1型细胞因子，募集更多的炎性细胞，放大了胰岛β的损伤效，同时胰岛素的缺乏导致了糖代谢、脂代谢的紊乱，进一步加重了DM病情，导致了并发症的发生、发展[4]。Th2型细胞亚群及其分泌的细胞因子在T1DM的发生中起着保护性免疫反应作用。IL4、IL10可广泛抑制活化巨噬/单核细胞的功能，包括单核因子、一氧化氮的生成及MHCⅡ类分子、共刺激分子的表达，阻止了胰岛β细胞免疫耐受的破坏[5]。

　　本研究结果显示T1DM患者由Th1型细胞亚群分泌的IFNγ、TNFα的水平显著高于NC组，Th2型细胞因子IL4、IL10的水平显著低于正常组(P<0.01)。BDM患者Th1型细胞因子IFNγ、TNFα显著高于SDM组，而Th2型细胞因子IL4、IL10的水平明显低于SDM组(P<0.05)。提示对Th1/Th2细胞亚群及其细胞因子的检测有助于对T1DM患者病情的监测，重建Th1/Th2亚群的平衡，恢复胰岛β细胞的耐受是T1DM免疫治疗的重要途径之一。

　　【参考文献】

　　1 张敏，李清友，刘鹏.糖尿病微血管病变与血小板参数的关系研究.河北医药，2009，31：2236.

　　2 Battaglia M，Stabilini A，Draghici E，et al.Induction of tolerance in type 1 diabetes via both CD4 CD25 T regulatory cells and T regulatory type 1 cells.Diabetes，2006，55：15711580.

　　3 ZaninZhorov A，Cahalon L，Tal G，et al.Heat shock protein 60 enhances CD4+ CD25+ regulatory T cell function via innate TLR2 signaling.J Clin Invest，2006，116：20222032.

　　4 叶学和,覃锦耀,梁深,等.1型糖尿病患者外周血中CD4+ CD25+与CD8+ CD28调节性T细胞水平的研究.中国糖尿病杂志,2009,17:473474.

　　5 Ramakrishna V，Jailkhani R.Evaluation of oxidative stress in Insulin Dependent Diabetes Mellitus(IDDM) patients.Diagn Pathol，2007，2：22.