甲亢方对甲状腺功能亢进模型大鼠甲状腺激素和甲状腺病理变化的影响

作者：胡方林,刘仙菊,易法银,阳春林,龙玲    作者单位：湖南中医药大学,湖南 长沙 410208 湖南省教育厅科研项目(05C362) 【摘要】  目的 观察甲亢方对甲状腺功能亢进(以下简称“甲亢”)模型大鼠甲状腺激素和甲状腺病理变化的影响。方法 将50只大鼠随机分为正常组、甲亢模型组、甲亢方中剂量组、甲亢方高剂量组、西药对照组(每组10只),除正常组外,其余4组大鼠每日按75 μg/100 g体重灌服优甲乐(左甲状腺素钠)造成大鼠甲亢模型,不同剂量甲亢方内服,并与西药对照,21 d后放免法测定血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)含量。结果 甲亢方能降低甲亢大鼠血清T3、T4、FT3、FT4含量,提高血清TSH,以高剂量效果显著；能改善甲亢模型大鼠甲状腺组织病理变化,其中高剂量组甲状腺组织结构基本同正常组。结论 甲亢方能够显著改善甲亢大鼠甲状腺功能和甲状腺组织病理变化。

【关键词】  甲状腺功能亢进症；甲亢方；甲状腺激素；甲状腺；大鼠

Effect of Jiakang Formula on Thyroid Hormone and Thyroid Pathological Changes of Experimental Hyperthyroid Rats

　　HU Fang-lin, LIU Xian-ju, YI Fa-yin, et al

　　Hunan University of TCM, Changsha 410208, China

    Abstract：Objective To observe the effect of Jiakang formula on thyroid hormone and thyroid pathological changes of experimental hyperthyroid rats. Methods Forty rats were given Euthyrox daily at 75 μg/100 g ig and randomly divided into hyperthyroidism model group, control group, middle dose Jiakang formula group, high dose Jiakang formula group, each with 10 rats, as well as 10 rats as normal group. Three weeks later, the rats were killed for observing the effect of Jiakang formula on thyroid hormone and thyroid pathological changes of experimental hyperthyroid rats. Result Jiakang formula could lower the level of FT3, FT4, T3, T4 and promote the level of TSH, also improve thyroid pathological changes, especially in high dose Jiakang formula group. Conclusions Jiakang formula had the effect of improving the function and pathology of thyroid on experimental hyperthyroid rats.    　　Key words：hyperthyroicism；Jiakang formula；thyroid hormone；thyroid；rat     甲状腺功能亢进症(以下简称“甲亢”)是一种常见的自身免疫性疾病,属中医学“瘿病”范畴。中医治疗“瘿病”历史悠久。在前期,我们已根据文献回顾性报道及临床实践前瞻性调查确立了甲亢的主要证型,拟定了益气养阴、清肝散结为治法的方剂甲亢方应用于临床,取得较好疗效[1-3]。在此基础上,为进一步探讨其药效学机理,我们以大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)及甲状腺病理变化为检测指标,观察甲亢方对甲亢大鼠的治疗作用。

　　1  实验材料

　　1.1  动物

    健康SD大鼠,清洁级,雌雄各半,体重(200±20)g,长沙市开福区东创实验动物中心提供,合格证号001270。

　　1.2  药物

    甲亢方：黄芪30 g,炒酸枣仁10 g,生地黄15 g,煅牡蛎20 g,白芍10 g,玄参10 g,夏枯草10 g,柴胡10 g,麦冬10 g,浙贝母6 g,丹参10 g,莪术10 g。上述药物购自湖南中医药大学杏林药号,共煎2次,合并2次药液,浓缩成1.35 g原药材/mL, 4 ℃储存备用。丙基硫氧嘧啶：RIEMSER Arzneimittel AG(Germany),批号608690,进口药品注册证号H20060262。左甲状腺素钠(优甲乐)：徳国默克公司,批号3985701。

　　1.3  主要试剂与仪器

    FT3放免试剂盒、FT4试剂盒、T3放免试剂盒、T4放免试剂盒、TSH免疫放射试剂盒,均购自北京福瑞生物工程公司。

    GC1200放射免疫γ计数器,中国科技大学中佳光电公司生产；低速离心机,LD4-2型,北京医用离心机厂生产；FA1004分析天平,上海天平仪器厂；BXSO光学显微镜,OLYMPUS产品。

　　2  实验方法    　　参考文献[4]方法,将50只大鼠称重标记,随机分为正常对照组、甲亢模型组、甲亢方中剂量组、甲亢方高剂量组、西药对照组(每组10只)。除正常组外,各组大鼠每日按75 μg/100 g体重灌服优甲乐进行造模,计21 d。第8日起,甲亢方中剂量组大鼠每日按13.5 g原药材/kg体重灌服甲亢方,甲亢方高剂量组每日按27 g/kg体重灌服甲亢方；西药对照组大鼠每日按20.25 mg/100 g体重灌服丙硫氧嘧啶。正常对照组灌服等容量生理盐水。各组大鼠每周称体重1次,根据体重调整药物剂量。21 d后,各组大鼠空腹称体重,颈动脉放血处死,2 mL血注入干净试管,离心,分离血清,分别用放射免疫法测定血清FT3、FT4、T3、T4含量,用免疫放射法测定血清TSH含量,具体操作按药盒说明书进行。摘取甲状腺并称重,甲状腺以10%福尔马林固定,常规切片,HE染色,进行病理学观察。

　　3  统计学方法

    应用SPSS13.0统计软件,所有数据均用x±s表示。2组间均数比较用t检验,多组间均数比较用方差分析。

　　4  结果

　　4.1  对甲亢大鼠外观行为的影响

    甲亢模型组大鼠实验第5日开始出现烦躁不安、活动频繁、饮水量多；鼠笼内潮湿,排泄物增多。至实验结束时,多数有震颤现象,全部明显消瘦、毛无光泽。各治疗组大鼠行动无力、烦躁、易激惹等现象均有不同程度的减轻,体重降低程度较模型组大鼠略有减少,笼内较干燥,排泄物较少。

　　4.2  对甲亢大鼠甲状腺激素含量的影响

　　(见表1) 表1  对甲亢大鼠血清T3、T4、FT3、FT4、TSH含量的影响(略)注：与甲亢模型组比较,△P＜0.05,△△P＜0.01；与正常对照组比较,*P＜0.05,**P＜0.01 　　4.3  甲状腺病理观察

　　4.3.1  肉眼观察

　　正常对照组大鼠的甲状腺为淡红色、扁平条梭状,不易见到峡部。甲亢模型组大鼠甲状腺均明显充血肿大,呈梭棰状,峡部增宽易见,而给药组大鼠的甲状腺均恢复至淡红色。

　　4.3.2  光镜观察

　　正常对照组：甲状腺滤泡大小基本一致,呈圆形或椭圆形,内充深红色染胶质,滤泡胶质染色均匀,滤泡间质无水肿,上皮细胞无增生。甲亢模型组：甲状腺滤泡有明显肿大,滤泡大小不一,增生变化明显,少数滤泡胶质稀薄甚至缺失,滤泡壁上皮细胞明显受压,内含丰富的颗粒状物质,可见上皮细胞增生及组织被膜和血管侵及,部分滤泡间质水肿,有的滤泡呈多层分布。西药对照组：可见甲状腺滤泡增生,颗粒状物质较多,部分滤泡间质水肿,其他甲状腺组织结构基本同正常组。甲亢方组：可见少数甲状腺滤泡增生,部分滤泡间质水肿,高剂量组滤泡壁上皮细胞内颗粒状物质增多；其他甲状腺组织结构基本同正常对照组。

　　5  讨论    　　目前现代医学对甲亢的发病机制尚未完全阐明。一般认为以遗传易感为背景,在感染、精神创伤等因素作用下,诱发体液免疫和细胞免疫功能紊乱。FT3、FT4是循环血中甲状腺激素的活性部分,二者不受血液中TBG和含碘杂质的影响而保持相对恒定,反映甲状腺功能状态的敏感性和特异性均明显超过T3和T4。目前临床上FT3、FT4诊断甲亢优于T4、T3；TSH是诊断原发性甲亢符合率较高的初筛性指标[5]。我们参照文献方法制作的甲亢大鼠模型,其症状、体征与甲亢的临床表现基本吻合,模型组FT3、FT4显著升高,FSH显著降低,符合甲亢的临床诊断标准。    　　中医认为,该病的发生主要与情志、体质、饮食等因素有关。正气不足或外邪入侵,以致气滞、血瘀、痰凝相互搏结而成瘿病。邪实正虚是其病因病机及疾病演变特点。本虚者以气、阴虚为主,标实者多为肝郁火炽痰凝血瘀。故益气滋阴、化痰散结、理气化瘀为恰当之法[6]。甲亢方由黄芪、生地黄、煅牡蛎、柴胡等组成,具有滋阴益气、化痰散结、疏肝理气之功效。方中重用黄芪,伍白芍以益气滋阴,共为君药；夏枯草清肝火、散郁结,牡蛎软坚散结,浙贝母清热化痰,合酸枣仁、麦冬宁心安神,并可助君药补益气阴,共为臣药；辅以玄参、丹参凉血解毒散结,柴胡助夏枯草直泻肝火,配莪术以行气散瘀,俱为佐使。全方标本兼顾,扶正祛邪,共奏益气养阴、理气散结之功。    　　　　本实验结果表明,甲亢方中剂量即具有显著的治疗效果,但不及高剂量组,这与临床经验相符。实验同时选用丙基硫氧嘧啶进行平行对照研究,高剂量组与之对比,差异无统计学意义,提示高剂量甲亢方对甲亢大鼠有与丙基硫氧嘧啶相似的治疗作用。推测其作用机制可能与改善机体免疫监护和调节功能,促进免疫功能的正常化有关。甲亢方高剂量组对甲亢大鼠各指标治疗效果类似于西药组,但在增加大鼠体重、改善外观行为方面明显优于西药组,提示该方在防止甲亢病情反复方面具有研究价值。

    本研究结果表明,滋阴益气之甲亢方内服能够有效改善甲亢大鼠甲状腺激素水平,改善甲亢模型大鼠甲状腺病理变化。但其具体作用机制尚待进一步研究。

【参考文献】  　 [1] 胡方林,刘 鹏,樊孝廉.内外合治甲亢的临床观察[J].中华中医药学刊, 2007,25(12)：2540.

　　[2] 胡方林,刘 鹏,罗长青,等.中药内外合治毒性弥漫性甲状腺肿临床观察[J].中国中医药信息杂志,2008,15(3)：62.

　　[3] 胡方林,刘 鹏,罗长青,等.中药内外结合治疗甲亢疗效观察[J].世界中西医结合杂志,2008,3(3)：148－150.

　　[4] 陈 奇.中药药理实验[M].贵阳：贵州人民出版社,1998.230.

　　[5] 赵桂云,王海生.FT3、FT4、RIA在突眼患者中的临床应用[J].放射免疫学杂志,2007,2O(1)：53.

　　[6] 胡方林.中医药内外合治甲亢的思路[J].光明中医,2007,22(8)：10.